細胞培養的三不要

細胞培養的三不要

    1. 不要燒瓶口。大多數人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,覺(jué)得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養基怎么越用越發(fā)紫的困惑?知道為什么嗎?燒瓶口燒的。培養基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候,熾熱的空氣進(jìn)入瓶?jì)取Ｈo塞子放入冰箱后,空氣變冷,壓力驟降,培養基中的碳酸就會(huì )轉化成二氧化碳,釋放出來(lái)。培養基中的碳酸少了,當然會(huì )變堿。如果不燒瓶口的話(huà),你會(huì )發(fā)現培養液變堿的速度會(huì )大大減慢。(當然多多少少還是會(huì )有一點(diǎn)越用越堿,因為室溫還是比冰箱內的溫度高)

    其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下,你會(huì )發(fā)現根本就不會(huì )燒疼。如果有細菌的話(huà),這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌,除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內從來(lái)就不燒瓶口。來(lái)美國以后發(fā)現這里超凈臺內根本就不點(diǎn)酒精燈。

    2. 不要頻繁看細胞。對于初學(xué)者而言,養細胞就像養孩子一樣,有空就要去看看。細胞越是養不好,就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細胞對細胞的生長(cháng)沒(méi)有任何好處,特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后,密度特別低的細胞。培養基中的生長(cháng)因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(cháng)的因子在其周?chē)?形成有利于生長(cháng)的局部環(huán)境。你跑去看細胞,培養瓶這么一晃,把因子都給晃散了。經(jīng)常可以看到新手一天到晚都在看細胞,細胞老是長(cháng)不好。老手細胞一扔好幾天不管,細胞瘋長(cháng)。

    3. 不要怕消化。在傳代的時(shí)候,初學(xué)者往往生怕細胞消化過(guò)度,早早地終止消化。細胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈,吹得滿(mǎn)瓶子都是氣泡。在我看來(lái),用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我師兄在做血管平滑肌原代的時(shí)候,37度消化過(guò)夜,細胞也沒(méi)事。我一般是等細胞完全變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來(lái)。還有,動(dòng)作要輕柔,盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時(shí)的機械應力相當大,對細胞的傷害也是很大的。